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目前,传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化,再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的,每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的,而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。
而为了克服运些缺点,具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究,但是运些多基因表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆W至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告基因与目标基因相连,运 样就导致蛋白或者基因的鉴定比较困难;另外,蛋白质二硫键异构酶,某些方法如采用同尾酶构建多基因载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所W构建多基因载体需要根据研究目的而设计。
蛋白表达系统
蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成:
1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。
2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为原核(细菌)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导,外源基因可以在宿主中表达。
3、辅助成分。有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。
工业应用领域
① 皮革脱毛:酶脱毛(50-55℃, PH7.0-8.0,20—25u/ml)→ 水洗 → 浸酸 →鞣制。
② 胶片回收银:50℃, PH9.5-10.5,用20—23u/ml进行回收。
③丝绸脱胶:预处理 → 脱水 → 酸处理(蛋白酶18—24u/ml,肥皂0.75%, 48—50℃,30—60分钟,PH7—8)→ 脱水 → 扯皮 → 冲洗 → 脱水 → 抖松 → 烘干 → 抖松。
④?饲料加工的应用:该酶与α—淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、糖化酶等复合使用。可广泛应用于仔猪、育成猪、禽类、鱼类的饲喂,可将酶制剂加入饲料后,人为的控制温度、湿度、PH和作用时间,使物料在酶的作用下得到一定程度的降解。小规模饲养时可将酶制剂直接添加到饲料中,经充分拌和后饲喂畜禽,拌和时应采用逐步扩大的拌和方法,以保证酶在饲料中的均匀分布。通常用量为饲料的0.1—1.0%。
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