腺病毒相关载体

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20世纪初孟德尔的工作被重新发现以后,他的定律又在许多动植物中得到验证。1909年丹麦学者W.L.约翰森提出了基因这一名词,用它来指任何一种生物中控制任何性状而其遗传规律又符合于孟德尔定律的遗传因子,并且提出基因型和表现型这样两个术语,前者是一个生物的基因成分,后者是这些基因所表现的性状。

1910年美国遗传学家兼胚胎学家T.H.摩尔根在果蝇中发现白色复眼(white eye, W)突变型,首先说明基因可以发生突变,而且由此可以知道型基因W+具有使果蝇的复眼发育成为红色这一生理功能。1911年摩尔根又在果蝇的X连锁基因白眼和短翅两品系的杂交子二代中,发现了白眼、短翅果蝇和正常的红眼长翅果蝇,首先指出位于同一染色体上的两个基因可以通过染色体交换而分处在两个同源染色体上。交换是一个普遍存在的遗传现象,不过直到20世纪40年代中期为止,还从来没有发现过交换发生在一个基因内部的现象。因此当时认为一个基因是一个功能单位,也是一个突变单位和一个交换单位。





腺病毒呈无囊膜的球形结构,其病毒粒子在感1染的细胞核内常呈晶格状排列,每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA,两端各有一个100~600 bp的反向末端重复序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的内侧为病毒包装信号,是病毒包装所需要的顺式作用元件。基因组包含早期表达的与腺病毒copy相关的E1~E4基因和晚期表达的与腺病毒颗粒组装相关的L1~L5基因。

线状双股DNA与蛋白形成直径为60~65 nm的髓芯,被包裹于衣壳内。衣壳呈二十面体对称,由252个直径8~10 nm的壳粒组成,壳粒排列在三角形的面上,每边6个,其中240个为六邻体(非顶点壳粒) ,另12个为五邻体基底(顶点壳粒)。每个六邻体是六邻体蛋白的同源三聚体,三聚体的六邻体分子有一个三角形的塔尖和五面体的基底,塔区由4个环构成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含两个区域P1、P2区[3]。六邻体上的表位(epitope)是诊断不同血1清型的标准,它包括哺乳动物腺病毒属的抗原成分,是病毒体对免1疫选择压力敏感的部位。

每个五邻体基底上结合着1根(哺乳动物腺病毒)或2根(禽腺病毒)长9~77. 5 nm的纤维突起,这些纤维以五邻体蛋白为基底由衣壳面伸出,纤维形成头节区,纤突有血1清特异性,且含有负责体外血细胞凝集的种属特异性抗原决定位点。



? ?转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术,在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰,出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: ? ?基因从原有机体转人宿主有机体中,两者的生理的差异对终产物影响而导致的性问题。

?? ?转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的小DNA部分片段,由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定,额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定,甚至产生不需要的性状或有毒物质。 ? ?基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等,质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的,目的基因的表达量难以预料,同一批的转1基因材料可能存在差异。

?? ?转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔,腺病毒相关载体,虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因,但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因,其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象,即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。



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