逆转录病毒滴度测定

电1击法

　　电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”，外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。

　　1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体，得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展，1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体，初步获得了完整的转0基因植株。electric shock法还可以对幼胚、愈伤组织和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’Hallum K等以玉米幼胚和愈伤组织为受体，用electric shock法导入neo基因，获得了可育的转0基因植株，并且neo基因能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electric shock法转化从玉米花粉愈伤组织分离的原生质体，将gusA和nptⅡ转入原生质体，获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后，通过electric shock法导入bar基因，也获得了可育的转0基因玉米。

　　电1击法操作简单，不受宿主限制，在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用，但是它的转化效率较低，而且对有壁细胞或组织的转化效果较差。

基因表达产物通常是蛋白质，但是非蛋白质编码基因如转移RNA（tRNA）或小核RNA（snRNA）基因的表达产物是功能性RNA。

所有已知的生命，无论是真核生物（包括多细胞生物）、原核生物（和古）或病毒，都利用基因表达来合成生命的大分子。基因表达可以通过对其中的几个步骤，包括转录，RNA剪接，翻译和翻译后修饰，进行调控来实现对基因表达的调控。基因调控赋予细胞对结构和功能的控制，基因调控是细胞分化、形态发生以及任何生物的多功能性和适应性的基础。基因调控也可以作为进化改变的底物，因为控制基因表达的时间、位置和量可以对基因在细胞或多细胞生物中的功能（作用）产生深远的影响。在遗传学中，基因表达是基因型产生表型的基本水平。存储在DNA中的遗传密码通过基因表达得到“翻译”，逆转录病毒滴度测定，并且基因表达的特性产生生物体的表型。因此，基因表达的调节对于生物体的发育至关重要。

腺病毒分离与鉴定

1．分离培养 标本应尽早从感1染部位。患者咽喉、眼分泌物，粪便和尿液等，加抗1生素处理过夜，离心取上清接种敏感细胞（293、Hep-2或HeLa细胞等），37℃孵育后可观察到典型CPE，即细胞变圆、团聚、有拉丝现象，较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。

2．病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）试验或中和试验（neutralization test）检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理，取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶，孵育1～2天，用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA；PCR可用于腺病毒感1染的诊断，引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列，能检测所有血1清型，而且其敏感性很高，能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻，其检出率可达80%。

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