T4DNA连接酶

概述：

 该酶催化契合的双链DNA或RNA的5?-磷酸末端和3?-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口⁽¹⁾。

 来源：

 纯化自重组E. coli菌株。

 应用：

 1. 限制性酶切片段的克隆⁽²⁾。
2. 将linker或adaptor连接到DNA片段的平滑末端。

 反应条件：

 1× T4 DNA连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C)，10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM ATP]，16°C温育。

 质量检测:

 核酸外切酶活性：50 ?l不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 ?g的Hind III消化的λDNA在37°C下温育4小时，DNA的电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 ?l不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 ?g的pUC19质粒于37°C下温育4小时，<5%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
纯度：经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。

 质保声明：

 T4 DNA连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

 单位定义：

 (粘性末端连接活性定义)：20 μl T4 DNA连接酶反应体系中，0.12 μM 5‘末端浓度，16°C反应30分钟，能使50%经Hind III消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。

 热失活：

 65°C温育10分钟即可失活。

 参考文献:

 1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). In P.D. Boyer (Ed.), The Enzymes Vol. 5, (p. 3). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J., et al. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.