Robustfusion超保真酶

概述：

 Robust fusion超保真酶，是经蛋白质工程改造的DNA聚合酶，兼具快速和高保真度的特性，可以在多种PCR反应中使用，在复杂模板条件下也有良好的表现。Robust fusion DNA聚合酶合成DNA的速率为2-4 kb/min，其保真度是普通Taq酶的50倍，是Pfu的6倍。Robust fusion DNA聚合酶具有5?→3?DNA聚合酶活性和3?→5?核酸外切酶活性，扩增产物为平末端。

 来源：

 携带有Robust fusion DNA聚合酶基因的E. coli菌株。

 应用：

 1. PCR。
2. 克隆。
3. 长片段扩增或困难模板扩增。
4. 高通量PCR。

 反应条件：

 50 μl反应体系中含有：1× Robust fusion HF或GC缓冲液，DNA模板，0.5 μM引物，200 μM dNTPs (不随酶附赠)，3% DMSO (可选) 和1 U Robust fusion DNA聚合酶。

 质量检测:

 核酸内切酶活性：50μl反应体系中，10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
7.5 kb基因组DNA PCR扩增：50 μl反应体系，1× Robust fusion HF缓冲液，50 ng基因组DNA，1 U Robust fusion DNA聚合酶，200 μM dNTPs和1 μM引物，30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
20 kb λDNA PCR扩增：50 μl反应体系，1× Robust fusion HF缓冲液，10 ng λDNA，1 U Robust fusion DNA聚合酶，200 μM dNTPs和1 μM引物，22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。 

 质保声明：

 Robust fusion超保真DNA聚合酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

 单位定义：

 1单位指在74°C条件下，反应30分钟能使10 nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。

 参考文献:

 1. Breslauer, K.J. et al. (1986) Predicting DNA duplex stability from the base sequence. Proc Natl Acad SciUSA, 83, 3746-3750.