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《一种通用高效的复杂载体构建的新方法》报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法。此法是在PCR引物设计时，在目的片段5′端加上随机设计的接头，利用PCR克隆目的片段，再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段，产生多个首尾相匹配的粘性末端，进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定。以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的构建为例，应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高。数10次实验证明：这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法，该法至今尚未见报道。
载体构建技术要点：
载体构建要点1：T4 DNA polymerase具有3’到5方向的外切酶活性，可以作用于双链DNA，它能将DNA链上的碱基从3’到5方向一个个地切下：同时该酶又具有5到3’方向聚合酶的活性，在dNTP存在的条件下表现出聚合酶的活性。因此文章利用这一特点加入一种特定单核苷酸对设定的位置使T4 DNA polymerase的外切停止，而合成其设计的黏性末端。
载体构建要点2：随机设计接头，在这篇文章中主要是通过
因此分别设计了TATC—GTAC，TGAC—ATAC，TACG—TCAG，TGAC—ATAC，TATC—TTTC和AAAC—GTAC引物接头，完成7个片段的拼接。
载体构建技术优点：
载体构建技术要点：
载体构建要点1：T4 DNA polymerase具有3’到5方向的外切酶活性，可以作用于双链DNA，它能将DNA链上的碱基从3’到5方向一个个地切下：同时该酶又具有5到3’方向聚合酶的活性，在dNTP存在的条件下表现出聚合酶的活性。因此文章利用这一特点加入一种特定单核苷酸对设定的位置使T4 DNA polymerase的外切停止，而合成其设计的黏性末端。
载体构建要点2：随机设计接头，在这篇文章中主要是通过
因此分别设计了TATC—GTAC，TGAC—ATAC，TACG—TCAG，TGAC—ATAC，TATC—TTTC和AAAC—GTAC引物接头，完成7个片段的拼接。
载体构建技术优点：
- 载体构建设计操作相对简便
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