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- 高温α-淀粉酶
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商品详细描述
大肠杆菌基因删除试剂盒说明书
一、概述
本试剂盒借助高效的Red重组系统实现突变基因盒在大肠杆菌基因组中的高效率重组，再利用自身的Xer重组系统实现靶基因突变后选择性标记高效删除。由此，可进行以大肠杆菌基因组为背景的多位点、多基因删除，方法简便，重组效率高，所获得的突变菌株染色体上无抗生素标记痕迹。本试剂盒理论上可以进行接近无限次的基因突变，故本试剂盒还可以用于大肠杆菌基因组最小化研究。使用本试剂盒，我们进行过最多15个基因的叠加删除。此外，本试剂盒经过适当修饰后可以同步用于外源基因在大肠杆菌基因组中整合表达等。
二、试剂盒制成及包装
2.1 本试剂盒提供的试剂与材如下表，可以满足10个单批操作。
2.2 需要自己准备的生物材料
1）特定基因PCR操作需要的引物。
2）大肠杆菌：自己研究的对象。
3）克隆PCR产物的T-载体，如：pMD18-T。
4）限制性酶。
5）T4 DNA连接酶。
三、试剂盒基因删除与操作原理
如图1所示。
四、基因删除步骤
一、概述
本试剂盒借助高效的Red重组系统实现突变基因盒在大肠杆菌基因组中的高效率重组，再利用自身的Xer重组系统实现靶基因突变后选择性标记高效删除。由此，可进行以大肠杆菌基因组为背景的多位点、多基因删除，方法简便，重组效率高，所获得的突变菌株染色体上无抗生素标记痕迹。本试剂盒理论上可以进行接近无限次的基因突变，故本试剂盒还可以用于大肠杆菌基因组最小化研究。使用本试剂盒，我们进行过最多15个基因的叠加删除。此外，本试剂盒经过适当修饰后可以同步用于外源基因在大肠杆菌基因组中整合表达等。
二、试剂盒制成及包装
2.1 本试剂盒提供的试剂与材如下表，可以满足10个单批操作。
|
生物材料 |
相关特征 |
数量 |
|
引物Gm1 |
ggtgcgcataatgtatattatgttaaat |
25 mL |
|
引物Gm2 |
atttaacataatatacattatgcgcacc |
25 mL |
|
抗性片段 |
dif-Gm-dif片段，含有庆大霉素抗性基因 |
10 mL |
|
pKD46 |
含有bla γ β exo (red重组酶系) 温控复制子 |
4 mL |
1）特定基因PCR操作需要的引物。
2）大肠杆菌：自己研究的对象。
3）克隆PCR产物的T-载体，如：pMD18-T。
4）限制性酶。
5）T4 DNA连接酶。
三、试剂盒基因删除与操作原理
如图1所示。
四、基因删除步骤
注：试剂盒所需试剂与耗材我公司均可提供或代为购买，详细可来电咨询
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