登革热快速检测试剂盒

澳大利亚Panbio登革热快速检测Elisa使用说明书

 

（我司同时有登革热，克锥虫，丝虫，非洲锥虫，恙虫，无形体，立次克体，基孔肯热，寨卡病毒，黄热病检测试剂盒，各种质控品，抗原，欢迎致电）

 

【产品名称】

通用名称：登革热快速检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Panbio Dengue IgG Capture ELISA

【包装规格】

96T/盒

【预期用途】

Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于推断性定性检测登革热病毒（1-4 血清型）继发性感染患者的 IgG抗体升高，辅助临床实验室诊断出现登革热病毒感染临床症状的患者，而且应该与 Panbio Dengue IgM Capture ELISA 和 Dengue Early ELISA 联用。Dengue Early ELISA 也可检测原发性登革热病毒感染。Panbio Dengue IgG Capture ELISA 最早可在疾病发作后 3 天检测到提示继发性登革热感染的高 IgG 水平。然而，准确诊断继发性感染的峰值检测窗口是在疾病发作后 6-15 天。阳性结果是推断出来的，必须经过病毒分离培养、配对血清分析、免疫组织化学抗原检测或病毒核酸检测来确认登革热病毒感染。

【检验原理】

血清中存在的登革热病毒 IgG 抗体，与微孔测试条（测定板）上聚苯乙烯表面包被的抗人 IgG 抗体结合。

用抗原稀释剂将浓缩的重组登革热 1-4 型抗原溶液稀释到正确的工作容积。用昆虫细胞表达系统产生原，用特异性单克隆抗体纯化抗原。在稀释后的抗原中添加等体积的辣根过氧化物酶（HRP）标记单克隆抗体（MAb），形成抗原 MAb 复合物。清洗测定板上的剩余血清，将抗原 MAb 复合物添加到测定板中。然后

这些抗原 MAb 复合物与血清登革热特异性 IgG 抗体结合。在培养完成后清洗微孔，再添加无色的底物系

统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢（TMB 显色液）。底物被 HRP（如存在）水解后，显色液变蓝。用酸终止反

应后，TMB 变黄。显色表示测试样本中存在抗登革热 IgG 抗体。

【主要组成成份】

1. 抗人 IgG 包被微孔 - （ 测定板）

（12x8 孔）。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

2. 登革热 1-4 型抗原（重组） - 1 瓶，无色瓶盖，包含 150μL（ 红色）浓缩的 1 型、2 型、3 型和 4 型登革热病毒抗原。未使用的稀释抗原必须丢弃。浓缩抗原在有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

3. 清洗缓冲液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水（pH 7.2 – 7.6），含吐温 20 和防腐

剂（0.1% Proclin?）。低温可能结晶。若去除结晶，可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。

4. 样本稀释剂 – 2 瓶， 50 mL（ 粉色）。即用型。Tris 缓冲生理盐水（pH 7.2 – 7.6），含防腐（0.1%

Proclin?）和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

5. 抗原稀释剂 – 1 瓶，50mL（ 无色）。即用型。磷酸盐缓冲液，含防腐剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

6. HRP 标记单克隆抗体示踪剂 – 1 瓶，7mL（ 绿色）。即用型。辣根过氧化物酶（HRP）标记单克隆抗体示踪剂，含防腐剂（0.1% Proclin?）和蛋白稳定剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

7. TMB 显色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物，存放于

枸橼酸盐缓冲液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

8. 反应控制品 – 1 瓶， 红色瓶盖，200μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

9. 校准品 – 1 瓶， 黄色瓶盖，400μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

10. 阴性质控品 – 1 瓶， 绿色瓶盖，200μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

11. 终止液 – 1 瓶， 红色瓶盖，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期内储存于 2-25℃可保持稳定。

检测需要但未提供的材料：

1.  精确、可调节的微量移液器，含一次性吸液头（5-1000 μL 容积）

2.  去离子水

3.  标板清洗系统

4.  酶标仪，含 450nm 滤波器

5.  计时器

6.  刻度量筒

7.  烧瓶

8.  试管或微滴定板，用于稀释血清

【储存条件及有效期】

有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

有效期可见包装标签。

【样本要求】

静脉穿刺获取的血液应该置于室温（20-25?C）下直到凝块形成，再按照临床实验室标准化研究院（CLSI）

的《认可标准——诊断用血液标本的静脉穿刺采集程序，H3》离心。

应该尽快分离血清。如果在 2 天内不进行检测，血清应该 2-8℃冷藏或低于- 20℃冷冻储存。不推荐使用

自解冻冷冻机储存血清。不推荐使用黄疸血清，以及出现溶血、脂血或微生物生长的血清。CLSI 提供了

储存血液标本的建议《认可标准——血液标本的处理加工程序，H18》。

【检验方法】

在进行检测前必须先完整阅读使用说明书，注：确保所有试剂在开始测定前平衡至室温（20-25 ℃ ）。未在规定的时间和温度范围内进行检测可能产生无效结果，不符合规定的检测应重新实施。

血清预稀释

1. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板并插入测试条槽。阴性质控品（N）、反应质控品（R）和校准品（CAL）各需 5 个微孔，一式三份。确保剩下未使用的微孔密封于铝箔袋内。

2. 使用适当的试管或微滴定板稀释阴性质控品、反应质控品、校准品和患者样本：

（1） 混合 10μL 血清与 1000μL 样本稀释剂。混合均匀。 或者，

（2） 混合 10μL 血清与 90μL 样本稀释剂。取出 20μL 稀释血清，加入 180μL 样本稀释剂。混合均匀。  

 

 

【参考值（参考范围）】

每个试剂盒包含校准品，反应质控品和阴性质控品。这些组成的可接受值参见附带的规格表。阴性质控品

和反应质控品用于监测重大的试剂失败。反应控制品不能确保测定临界值的精密度。如果质控品或校准品

的任一吸光度读数不符合规定，则测试无效且必须重新测试。如果测试无效，则不能报告患者结果。必须

按照地方、州和/或联邦法规或认证要求以及实验室标准 QC 程序执行质控（QC）要求。有关适当的 QC 操作规程指南，建议用户参考 CLSI C24-A 和 42 CFR 493.1256。

运算

重要提示：校准系数是针对批次的，详见规格表。在开始计算之前获取校准系数值。

1. 计算校准品三份平行试样的吸光度平均值，乘以校准系数，得出临界值。

2. 用样本吸光度除以（以上第 1 步得出的）临界值，计算指数值。或者，

3. 用（以上第 2 步得出的）指数值乘以 10，计算 Panbio 单位。

指数值 =  样本 吸光度/ 临界值

例如：样本 A 吸光度=0.949

样本 B 吸光度=0.070

校准品的平均吸光度=0.802

校准系数=0.62

临界值=0.802x0.62=0.497

样本 A 的指数值(0.949/0.497) = 1.91

样本 B 的指数值 (0.070/0.497) = 0.14

Panbio  单位 = 指数值 x 10

样本 A 的 Panbio 单位 1.91x10 = 19.1

样本 B 的 Panbio 单位 0.14x10 = 1.4

结果判读

Panbio Dengue IgG Capture ELISA 推断性检测患者血清中的登革热病毒 IgG 抗体水平升高。阳性结果

（>22 Panbio 单位）提示活动性继发感染。如果怀疑患者是原发性登革热感染，则该测定应该与 Panbio

Dengue IgM Capture (01PE20) ELISA 联用。

 

【检验结果的解释】

阴性
检测不到 IgG 抗体水平升高。根据 IgG 抗体水平没有升高，可以推
测患者没有继发性登革热感染。Panbio 单位<18 的样本应该用
Panbio Dengue IgM Capture ELISA (01PE20)检测是否存在原发性
登革热病毒感染。应该执行其他登革热检测（例如，培养、PCR、
NS1 抗原检测）来排除急性感染。登革热感染的确诊请参考 CDC
MMWR 建议和报告 1997:46 RR – 10（第 45 页至第 46 页）。
不确定
结果不确定的样本应该一式二份重新检测。如果两个结果都高于或
低于临界值，则报告标本分别为阳性或阴性。如果一个结果高于临
界值而另一个结果低于临界值，或者任一重复检测结果为不确定，
则报告无法确定登革热病毒 IgG 升高，应该用另外一种方法重新检
测。或者，应该采集另一份样本。
阳性
检测到 IgG 抗体水平升高，推测患者近期接触过或目前感染了登革
热病毒，符合继发性感染的标准。通过当前的 CDC 导则确认结果来
诊断疾病。登革热感染的确诊请参考 CDC MMWR 建议和报告
1997:46 RR – 10（第 45 页至第 46 页）

【检验方法的局限性】

1.  必须结合患者的临床体征和症状来做临床诊断。该试剂盒的结果本身并没有诊断作用，应该与其他临

床数据和患者症状联用。

2.  不可用于筛查普通人群。阳性预测值取决于病毒存在的可能性。只能检测有临床症状或疑似接触过相

关病毒的患者。

3.  尚未确定目测结果判定的检测性能特征。

4.  必须谨慎判读免疫受抑制的患者结果。

5.  黄病毒属疾病（即圣路易脑炎，墨累山谷脑炎，日本脑炎，西尼罗河和黄热病病毒）之间的血清学交

叉反应是常见的。在确诊之前必须排除这些疾病。

6.  一般来说，初级响应者主要表现出单型抗体应答。但是，在连续感染期间，抗体应答扩大到对同一或

不同抗原组的其它黄病毒的异型反应 。

7.  Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测结果为阳性的所有血清必须送到参考实验室进行确认和流行

病学记录。

8.  当前感染登革热病毒的患者可能获得阴性结果。在感染非常早期获得的样本可能检测不到抗体。疑似

急性感染应该用 Panbio Early ELISA 或检测急性感染的其它试验来检测。

9.  原发性登革热感染个体康复后的样本 IgG 抗体水平可能高于测定阈值。建议在 6-15 天内检测样本来

准确区分原发性和继发性感染。

【产品性能指标】

研究中心 1

在位于布里斯班的 Panbio Ltd 公司用 Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测了共 316 份回顾性血清。

血清盘包含 161 份来自地方人口中健康捐献者的样本，66 份来自非地方人口的样本，35 份经过 HAI 检测为原发性登革热感染的阳性样本以及 54 份经过 HAI 检测为继发性登革热感染的阳性样本。根据检测结果，确定该试验的血清学灵敏度、特异性和一致性。

*由于样本量不足，没有重新检测结果不确定的样本。

95% CI #

血清学灵敏度（继发性） b = 52/54  = 96.3%  73.8 – 93.6%

血清学特异性（原发性） b = 32/35  = 91.4%  76.9 – 98.2%

血清学特异性（地方性）  = 152/161  = 94.4%  88.4 – 100.0%

血清学特异性（非地方性）  = 66/66  = 100.0%  88.4 – 100.0%

血清学一致性b = 302/316  = 95.6%  92.7 – 97.6%

a 经 HAI 检测为继发性登革热感染的阳性样本（滴度≥1280）。

b 不包括不确定的结果，因为没有对不确定的样本进行重新检测（见上述*）。

# 置信区间

研究中心2

用Panbio Dengue IgG Capture ELISA检测马来西亚一所大学收集的404份血清，血清的登革热特征经过

血凝抑制试验(HAI)、IgM ELISA、NS1 ELISA和PCR联合测定。血清盘包含125份来自地方人口的血清反

应阴性样本，101份经过分析（主要是配对样本分析）为原发性登革热感染的阳性样本以及178份经过分析（配对样本分析）为继发性登革热感染的阳性样本。这些样本代表疾病发作后2-15天的检测范围。根据检测结果，确定该试验的血清学灵敏度、特异性和一致性。

95% CI #

血清学灵敏度（继发性）  = 144/178  = 80.9%  75.1 – 86.7%

血清学特异性（原发性）  = 88/101  = 87.1%  80.6 – 93.7%

血清学特异性（地方阴性）  = 125/125  = 100.0%  97.1– 100.0%

血清学一致性  = 357/404  = 88.4%  85.2 – 91.5%

a 在 10 份样本中有 7 份样本原发性登革热诊断结果不确定，原因是配对样本分离不足 7 天，恰巧后面一份样本的 HAI 滴度为 640。

b 在 31 份样本中有 27 份样本是在疾病发作后 2-5 天采集的。继发性检测的准确度在疾病发作后 6-15 天最佳，也就是该试验的推荐检测窗口。在 6-15 天窗口内继发性检测的灵敏度是 95.4%。

*由于样本量不足，没有重新检测结果不确定的样本。

# 置信区间

研究中心 3

在泰国曼谷具有国际地位的参考实验室检测了收集的 310 份配对血清，血清的登革热特征经过 PCR 以及

该参考实验室的内部登革热 IgM 和 IgG ELISAs 结合配对血清分析测定。血清包含从 30 名原发性登革热患者获得的 60 份阳性样本，从 100 名感染所有 4 种血清型的继发性登革热患者获得的 200 份阳性样本，以及从 25 名经过血清学和 PCR 检测均为阴性的患者获得的 50 份地方性样本。用 Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测全部血清以确定该试验的性能。

95% CI #

血清学灵敏度（继发性） a = 159/200  = 79.5%  73.9 – 85.1%

血清学特异性（原发性） a = 55/60  = 91.7%  81.6 – 97.2%

血清学特异性（地方阴性）  = 50/50  = 100%  92.9 – 100.0%

血清学一致性  = 264/310  = 85.2%  81.2 – 89.1%

a 在33份样本中有20份样本是在疾病发作后3-5天采集的。继发性检测的准确度在疾病发作后6-15天最佳，也就是该试验的推荐检测窗口。在6-15天窗口内继发性检测的灵敏度是87.9%。

*由于样本量不足，没有重新检测结果不确定的样本。

# 置信区间

 

再现性

由1名操作员在不同的3天用3批Panbio Dengue IgG Capture ELISA对8份血清各检测3次来测定该试验的再现性。利用方差分析（ANOVA II型）评估运行内、日间、批间和总精密度。

所有值都是用指数值计算的（临界值用OD）

SD=标准差；CV=变异系数

注：为了制表，标准差结果四舍五入为两位小数。

* 指数值是用样本吸光度除以临界值计算得出的。

 

交叉反应性

检测一组来自确诊为非登革热患者的65份标本，以确定Panbio Dengue IgG Capture ELISA的分析特异性。这些标本来自可能具有交叉反应性疾病的患者。在分析之前用Panbio Dengue IgG Capture ELISA确定了该研究包含的每份标本的相关疾病诊断特征。

 

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