纤维素酶生产与应用专利

1、单菌株发酵和混合菌株发酵产纤/维素酶研究


关于纤/维素酶的生产方法，国内研究较多是单菌株发酵产纤/维素酶，混合菌株发酵研究较少。本文选用实验室筛选的三株纤/维素酶生产菌，进行了单菌株与双菌株混合摇瓶发酵实验，对六种不同发酵液进行了纤维酶的提取纯化对比研究，并比较了它们各自纤/维素酶酶系组分。具体概括如下：1、串珠霉、链霉菌、枝孢菌初始单菌发酵实验中，串珠霉产酶活力最高，链霉菌最低。串珠霉产CMC酶、FPA酶和8G酶活力分别为1.46 IU、1.04 IU、0.38 IU。2、通过单因素和SAS二水平设计及响应面分析，得到了串珠霉发酵产纤/维素酶最佳条件。PB设计法筛选出影响其产酶活力的显著因素为稻草添加量、麸皮添加量和pH。BB设计法对这三个显著因素响应分析得最佳发酵...................共45页


2、固定化纤/维素酶的制备与其性质研究


纤/维素酶及其作用的底物非常复杂，影响因素繁多，水解速度缓慢，酶解效率不高，酶的利用率低，所以实际应用还存在许多困难。 酶的固定化技术是现代生物技术及其工业化环节中的一个核心技术，固定化酶在工业、医学、分析与分离技术以及化学合成等领域有着广泛的用途。固定化酶催化反应技术具有能回收、易分离、反复多次使用等优点，为提高纤/维素酶的使用效率、降低生产成本提供了可能性，因此纤/维素酶的固定化研究长期以来备受关注。本文从固定化酶的载体、固定化纤/维素酶的制备方法和性质等方面进行了相关研究。分别选择球状壳聚糖和球状壳聚糖-聚乙二醇共混物为载体，以戊二醛为载体活化剂，采用共价结合法固定化纤/维素酶...................共50页


3、固态混菌发酵纤/维素酶工艺


介绍了纤/维素酶的相关知识、当前纤/维素酶发酵工艺的研究进展及遇到的问题。(2)通过紫外诱变育种的方法选育出产酶活性较高的绿色木霉诱变株,与原菌株相比,诱变株的产酶活性提高193%。(3)通过单因素考察,硫酸铵的添加量,培养时间,培养温度,培养基初始pH对产酶活性的影响较大。4)通过优化实验,绿色木霉诱变株最好的产酶条件为：麸皮：秸秆=1：4(总5g),料水比1：2,2%吐温20,2%的硫酸铵,温度30℃,培养时间120h,初始pH值4.4。产酶活性：FPA酶活为12.15 IU/g,C1酶活为16.57 IU/g,Cx酶活18.39 IU/g,β-葡萄糖苷酶酶活13.81 IU/g。(5)通过绿色木霉酶与黑曲霉的混菌发酵试...................共40页


4、菌株JF14的分离与其固态发酵产纤/维素酶的研究


本文基于获得高效降解纤/维素菌株这一目的出发，从朽木条、森林土壤、牛粪等样品中分离到7株能在以梭甲基纤/维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的固体培养基上生长的菌株，通过刚果红纤/维素平板识别，以及固体产酶鉴定，最后从中筛选得到一株分解纤/维素能力较强的真菌菌株JF14，经形态观察和ITS序列分析，该菌株被鉴定为木霉属棘孢木霉种(Trichodermaasperellum)。通过对该菌株的固体发酵条件进行单因子优化实验，初步确定了其培养基最佳的碳源和氮源种类及其添加比例，即蔗渣：麸皮=3.5:1.5，(NH4)2SO40.1g以及最适培养...................共52页


5、康氏木霉产纤/维素酶调控机制研究


为利用康氏木霉(Trichoderma.koningii)降解稻草提供工艺参数,以康氏木霉(T.koningii)N18为菌株,进行了固体发酵产纤/维素酶条件的优化。确定了康氏木霉(T.koningii)的最佳固体发酵培养条件:稻草:麸皮的最佳比例为6:2,最佳氮源为(NH)SO,碳氮比为6:1,含水量为200%,最适产酶pH为6.0,最佳产酶温度为28℃,最佳产酶时间为7d,康氏木霉(T.koningii)所产纤/维素酶各组分酶活力分别为:羧甲基纤/维素酶活力为321.64U.mL,滤纸分解酶活力为59.58U.mL。4 2 4-1-1...................共42页


6、木薯酒糟生产纤/维素酶和酶解转化的初步探索


木薯酒糟是木薯酒精厂的废弃物,含有一定量的纤/维素、半纤/维素和果胶等物质,本论文以综合利用木薯酒糟为目的,进行了以下几方面的研究：一、以实验室现有的菌株,利用工厂的纤维废弃物生产廉价高效的纤/维素酶。通过单因子实验、正交实验以及响应面分析等方法,确定当木薯酒糟粒径小于0.425 mm,种子培养时间为24 h,接种量20%,培养温度30℃,初始pH 6.5,(NH4)2HPO40.35 g,KH2PO40.3 g,麸皮3 g,酒糟7 g,料水比为1：1.5时,绿色木霉GV固态发酵得到的纤/维素酶活为56.37 IU／g干曲；当木糖渣的粒径在0.15-0.30mm,培养基料水比1：2,初始pH6.5,木糖渣3g,麸皮7g,(NH...................共48页


7、纳米技术固定化纤/维素酶的研究


探索了两种微乳法固定纤/维素酶的方法,其中微乳冻融法以PVA/y-Fe2O3体系为固定化酶颗粒的骨架,加入纤/维素酶后形成的混合溶液作为水相,以硅油为油相,用油包水微乳化方法,通过微乳分散形成的固定化反应室,进而通过反复冻融的方法对纤/维素酶进行固定。实验证明不同比例的PVA和γ-Fe2O3会影响固定化颗粒中的粒径大小和表面电荷。当PVA和y-Fe2O3的质量比为50时,固定化酶颗粒的粒径最小。采用表面活性剂span80、物理冻融一次的体系可以获得较佳效果,其酶活力残留率达到83.9%。制备的固定化酶颗粒性良好、粒形完整、粒径在300nm左右。与游离纤/维素...................共40页


8、青霉液态发酵生产纤/维素酶的研究


通过考察种子培养时间、接种量、装液量、温度、转速和初始pH对产酶的影响,确定了纤/维素酶液态发酵的适宜条件为：种子培养时间32h,接种量10%,装液量100mL,温度30℃,转速200r/min,初始pH5.0。在此条件下滤纸酶活和CMC酶活分别提高61.57%和26.68%。(2)考察了不同纤/维素原料,如木糖渣、汽爆高梁杆,S.F和微晶纤/维素等对纤/维素酶发酵的影响。结果表明,经过汽爆预处理的高粱秆所产酶活均高于未做任何处理的高粱秆,以3：1的液固比在0.75%的硫酸溶液中浸泡12h后,在3MP的压力下汽爆150s最有利于产酶,滤纸酶活和CMC酶活与未作任何处理的高粱秆相比可分...................共51页


9、双水相萃取技术分离纤/维素酶和甘草酸应用研究


介绍了双水相的性质及其萃取原理，介绍了双水相萃取的优越性，归纳了双水相萃取的应用领域，特别是对双水相的国内外研究进展进行了综述，同时对双水相萃取的一般规律进行了总结。本文选择资源丰富，用途广泛的中草药甘草和纤/维素酶为研究对象，采用双水相萃取技术分离提取。首先针对聚乙二醇／硫酸铵和聚乙二醇／磷酸氢二钾这两个双水相体系进行比较，选取较好聚乙二醇／硫酸铵的双水相体系用于双水相...................共44页


10、微生物发酵法生产纤/维素酶


纤/维素酶是一种重要的酶产品,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高（略）力.生物和化学抗性非常强的天然纤/维素大分子可以在这三类酶共同水解的作用下,降解成为结构简单的葡萄糖分子.这对于缓解当前全世界所面临的粮食、能源以及环（略）题具有非常重要的作用.目前,限制纤/维素酶广泛应用的原因主要是纤/维素酶产生菌的产酶能力比较低,且所产酶系的组分不平衡.人们针对纤/维素酶菌株工业化生（略）的这些实...................共50页


11、纤/维素酶的纯化及固定化研究


纤/维素酶是降解纤/维素的一组酶的总称，是起协同作用的多组份酶系，从被发现起就受到世界各国生物界的重视。现在纤/维素酶应用已扩展到医药、纺织、日用化工、造纸、食品发酵、工业洗涤、烟草、石油开采、废水处理及饲料等各个领域。本文从两方面系统的对纤/维素酶的利用做了实验研究。一方面是作为工具酶，经逐步分离纯化，除去杂蛋白及色素，用于植物细胞原生质体制备方面的科学研究；另一方面是用粗提的纤/维素酶固定化后，...................共45页


12、纤/维素酶的定向进化/定点诱变及耐碱机理研究


采用体外定向进化和定点诱变的方法对纤/维素酶进行分子改造，以期获得碱性条件下酶活提高的耐碱性突变株。 本文采用易错PCR技术和致突变菌株技术，建立了纤/维素酶突变体文库。使用双层平板检测法和液体酶活验证法对突变体库进行筛选，一共筛选了600个突变体，没有筛到碱性酶活提高的突变体，只获得一株耐酸性突变体(Cel 18-7-12)，最适pH为6.0。测序结果显示，纤/维素酶第339位的氨基酸由Ile变为Thr，并且发生终止突变造成C-末端25个氨基酸的缺失。为了研究纤/维素酶C-末端CBD对酶活性质的影响，设计引物采用PCR方法切除纤/维素酶C末端163个氨基酸...................共42页


13、纤/维素酶的制备及玉米秸秆固态发酵生产酒精的研究


采用固态发酵技术,利用丰富、价廉的玉米秸秆为原料,摸索了里氏木霉LW1(Trichode（略）esei LW1)适宜的产酶条件,研究了秸杆粉和麦麸用量、料水比、起始pH值、发酵温度和发酵时间对该菌株产纤/维素酶活力的影响.试验结果表明,里氏木霉LW1的适宜发酵条件为:在秸秆:麦麸=1∶1,料水比为1∶2的前提条件下,通过正交实验分析,在培养温度28℃,发酵周期为（略）pH5.5时产酶活力最高.在适宜培养条件下,发酵液中羧甲基纤/维素酶活为467.700/u,滤纸酶活为271.363/u. 研究了里氏木霉LW1所产纤/维素酶的主要酶学性质,结果表明,该纤/维素...................共52页


14、纤/维素酶发酵工艺条件优化研究


纤/维素酶产生菌的产酶能力低,且所产酶系的组分不平衡是纤/维素酶未能实现大规模工业化生产及应用的主要原因。针对目前产纤/维素酶菌株在生产实际中存在的问题,人们进行了多方面的努力,包括诱变育种、发酵条件优化、纤/维素酶基因克隆等,但是我国一直没有取得突破性进展。生产厂家主要采用固态发酵法,纤/维素酶液态深层发酵条件的研究仅处在实验室水平。本研究以我研究室购买、诱变的纤/维素酶产生菌——绿色木霉SP13010(Trichoderma viride)作为发酵菌株,研究了该菌株的形态特征和产纤/维素酶的动态变化过程;比较了不同的营养源与生长条件对菌株产纤/维素酶的影响;优化、确定了菌株产纤/维素酶的发酵培养基;探讨了菌株发酵产纤/维素酶的影...................共55页


15、纤/维素酶发酵生产及其降解秸秆性能研究


本文对纤/维素酶的微生物发酵生产、发酵酶液的分离提取及植物秸秆酶水解前的预处理方法等进行了研究。 研究了里氏木霉的纤/维素酶发酵生产条件。首先利用统计学软件SAS对摇瓶培养基组成进行了优化,确定最佳发酵培养基组成:玉米浆28.0g/L,葡萄糖26.2g/L,微晶纤/维素34.7g/L,柠檬酸1.17 g/L。纤/维素酶活摇瓶发酵的理论预计值为20.1U/mL,在最佳发酵培养基组成下进行发酵,纤/维素酶的滤纸酶活达到20U/mL。对5L发酵罐的发酵过程进行了研究,包括间歇发酵和补料发酵两种模式。间歇发酵的最终酶活是54.1U/mL,而补料发酵的最终酶活达到65.6 U/mL。最后对间歇发酵的发酵动力学...................共52页


16、纤/维素酶高产菌的筛选


纤/维素酶的应用现在己扩展到医药、遗传、纺织、日用化工、造纸、环境、能源、食品发酵、饲料、工业洗涤、石油开采、资源再生、废水处理、农业、动物营养学、中草药有效成分的提取等各个领域。其应用前景十分广阔。纤/维素酶高产菌的筛选和产酶研究具有重要的生态效益、经济效益，社会意义。从校园和榆中县兴隆山次生林区采样，用羧甲基纤/维素钠培养基和刚果红纤/维素鉴别培养基进行初筛，筛选出水解圈直径和菌落直径之比较大的产纤/维素酶菌株160株，这160株菌株经过发酵产酶后，通过测酶活进一步筛选出CMC酶活和滤纸酶活同时都较高的纤/维素酶高产菌...................共40页


17、纤/维素酶高产菌诱变选育及发酵工艺初步研究


进行了发酵罐分批发酵试验和补料分批发酵试验，发现发酵过程中采用分段控制温度和溶解氧的工艺，产酶较不分段控制有明显提高。最后，采用分段控制温度和溶氧及全组分补料工艺，进行30L罐分批发酵，FPA酶活和CMCase酶活可分别达到15.24IU/mL和596.70IU/mL。采用板框过滤及超滤膜分离工艺，对发酵液进行了提取浓缩。液体酶总收率为73～77％，液体浓缩酶FPA酶活力达到45IU/mL，CMCase1800IU/mL。对酶的性质作了初步研究。得出了FPA和CMCase酶活最适作用pH值和温度，及稳定pH值和温度范围。测定了多种助剂和不同金属离子对酶活的影响...................共45页


18、纤/维素酶新型发酵工艺研究


对纤/维素酶传统发酵采用的固态发酵、液态发酵工艺及本文提出的固-液交替新型发酵工艺从单菌发酵、混菌发酵纤/维素酶活性及纤/维素酶得率3 方面进行了系统的比较研究,同时研究了两种提取剂及8 种氮源对固态发酵产物纤/维素酶活性测定结果的影响。主要结果如下:1.前人测定纤/维素酶活采用缓冲液提取剂与纯水为提取剂时测定所得纤/维素酶活不同。本研究得到的酶活测定结果表明,对于青霉Q1 和黑曲霉H8,用纯水浸提时的纤/维素酶活性高于缓冲液提取。以水为提取剂测定纤/维素酶活性时,浸提时间应控制在45min 左右,时间过长会导致酶活降低 ...................共38页


19、一种生产纤/维素酶方法
20、汽爆秸秆固态发酵生产高活性纤/维素酶方法
21、磁性微球固定化纤/维素酶制备方法
22、高活性纤/维素酶组合物与其制备方法
23、变异碱性纤/维素酶
24、纤/维素酶固体发酵大规模生产方法与其设备
25、一种高活力木本饲料专用复合纤/维素酶制备方法
26、具表面活性剂耐性新型纤/维素酶
27、液-固两相发酵生产饲料用高活性纤/维素酶方法
28、液-固两相发酵生产纺织/造纸用高活性纤/维素酶制剂方法
29、半连续固态发酵—浸提耦合生产纤/维素酶方法
30、电场强化固态发酵生产纤/维素酶方法
31、高活性纤/维素酶与其制造方法
32、一种利用生物表面活性剂提高绿色木霉纤/维素酶活方法
33、一种热稳定饲用纤/维素酶固态生产技术
34、利用酵母菌生产纤/维素酶方法
35、用于纤/维素酶法水解上流式沉降反应器
36、微生物发酵生产低温纤/维素酶方法
37、一种用转基因植物联产纤/维素酶与其它酶方法
38、多功能纤/维素酶与其应用
39、改善纤/维素酶
40、纤/维素酶产生
41、一种耐高温饲用纤/维素酶制备工艺
42、新纤/维素酶与其应用
43、一种利用秸秆细胞壁蛋白构建高效纤/维素酶解体系
44、一种利用漆酶协同纤/维素酶提高汽爆秸秆酶解效率方法
45、一种酸性液体纤/维素酶生产方法
46、纤/维素酶以与纤维低聚糖制造方法
47、一种利用含有木质纤/维素生物质发酵生产气体燃料与副产纤/维素酶方法
48、稀硫酸处理纸浆作为碳源促进里氏木霉合成纤/维素酶方法
49、一种提高纤/维素酶产量里氏木霉培养方法
50、一种肠溶衣材料固定化纤/维素酶制备方法
51、粉末状纤/维素酶固体制剂制备方法
52、一株组成型酸性内切纤/维素酶高产菌株
53、从菌糠中制备纤/维素酶方法
54、一种利用甜玉米副产物制备饲料用纤/维素酶方法
55、一种用于牛仔成衣水洗固体纤/维素酶
56、纤/维素酶生产方法
57、一种共价增强型纤/维素酶固定化方法
58、一种纤/维素酶配合物与其制备方法
59、一种白腐菌预处理稻草秸秆提高产纤/维素酶菌株酶活力方法
60、一种纤/维素酶制备方法
61、一种真菌筛选方法以与采用该菌种生产纤/维素酶方法
62、产纤/维素酶菌剂与其应用
63、纤/维素酶酶活促进剂与其制备方法
64、生料固态发酵生产纤/维素酶方法
65、一种高产纤/维素酶方法
66、制备液体纤/维素酶方法
67、从木霉复合酶中分离浓缩果胶酶和纤/维素酶方法
68、偏酸性纤/维素酶生产方法
69、一种纤/维素酶产生菌与其制备和应用
70、一株产碱性纤/维素酶菌株LT与其选育方法和产酶条件初步优化
71、一种橄榄纤/维素纺织面料和纤/维素酶提取与配制方法
72、纤/维素酶高产菌株筛选方法
73、以齐整小核菌为菌种生产高活性纤/维素酶
74、利用里氏木霉制备纤/维素酶
75、利用黑曲霉液体深层发酵产纤/维素酶
76、一种以造纸短纤维为碳源发酵生产液体纤/维素酶方法
77、一种联产木聚糖酶和纤/维素酶方法
78、一种提高真菌产纤/维素酶酶活方法
79、产纤/维素酶菌剂与其应用
80、一种液态纤/维素酶制备方法
81、一种黑曲霉菌株发酵生产纤/维素酶和多肽蛋白饲料制备方法
82、一种微生物纤/维素酶制造方法
83、稻草秸秆提取纤/维素酶与生物饲料生产系统
84、膨胀素组合物以与增加纤/维素酶效率方法
85、利用瞬时农杆菌渗入法在植物主体中制备纤/维素酶
86、一种植物纤维原料纤/维素酶解发酵制取乙醇方法
87、一种高效生产纤/维素酶方法
88、一种高活力纤/维素酶和饲料蛋白联产发酵方法
89、一种纤/维素酶固体发酵生产方法
90、海洋微生物发酵生产低温纤/维素酶方法
91、一种检测生物膜纤/维素酶活性分析方法
92、制备纤/维素酶方法
93、高活性纤/维素酶制备方法
94、一种海洋黑曲霉生产耐盐纤/维素酶液体发酵方法
95、一种海洋黑曲霉生产耐盐纤/维素酶固体发酵方法
96、提高纤/维素酶水解木质纤/维素萃取方法
97、燃料乙醇生产中回收再利用纤/维素酶全组份方法
98、超声波辅助纤/维素酶解过程方法
99、纤/维素酶稳定助剂组合物
100、一种利用宇佐美曲霉生产纤/维素酶方法
101、一种重组多功能纤/维素酶生产方法
102、一种抛光纤/维素酶灭活方法
103、一种原位分离产纤/维素酶放线菌装置
104、一种微生物混合发酵生产液体纤/维素酶方法
105、一种利用离子液体预处理提高纤/维素酶解产糖率方法
106、一种分离产生纤/维素酶细菌方法
107、一种纤/维素酶制备方法
108、一种高通量筛选降解秸秆高活力纤/维素酶方法
109、一种用于生产纤/维素酶和半纤/维素酶发酵菌剂
110、纤/维素酶生产与其应用技术
111、高活性纤/维素酶制造方法
112、碱性纤/维素酶与其生产方法
113、碱性纤/维素酶与其产生方法
114、用于工业过程获自褐色高温单孢菌纤/维素酶
115、高分子量木霉纤/维素酶