RNA共沉淀RIP技术

RNA免yi沉淀RIP实验原理

细胞裂解后，孵育结合了抗体的珠子，诱饵蛋白通过其抗体结合到Beads上，同时和诱饵蛋白互作的RNA，也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的RNA后，再用洗脱液将RNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来，便得到RNA免yi沉淀产物。RIP产物既可用qPCR检测已知RNA，也可以二代测序检测未知RNA。
当没有合适的诱饵蛋白抗体时，可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白，利用flag标签做免yi沉淀。即细胞过表达Flag-Bait，经裂解后与anti-Flag珠子孵育，诱饵融合蛋白与Beads结合，与诱饵融合蛋白互作的RNA“共沉淀”到Beads上，再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。

RNA免yi沉淀RIP实验流程

带标签的RNA免yi共沉淀流程图：



RNA免yi沉淀RIP技术应用

筛选或验证与诱饵蛋白互作的RNA

RNA免yi沉淀RIP服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验，客户成果发表在Nature Methods，Cell Research等高水平期刊上；
2. 可对围绕RNA结合蛋白开展的整体课题提供全fang位方案建议；
3. 自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行蕞优的实验路线；
4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。

RNA免yi沉淀RIP服务信息

RNA免yi共沉淀RIP 客户文献

1. Bao X.C. et al: Capturing the interactome of newly transcribed RNA.Nature Methods,15(3): 213–220. 2018，IF=28.467. 【研究内容】：辉骏生物为作者单位之一，和作者共同开发了一种捕获鉴定新生RNA结合蛋白的全新方法（RICK）。该方法用EU标记新生RNA，通过点击反应-生物素-链霉亲和素系统结合质谱分析，分离鉴定RNA互作蛋白。其中，METTL1和CDK1是两个RICK独有的RNA结合蛋白。 RIP-qPCR、RIP-Seq、CLIP-Seq等实验进一步证实了它们与非PolyA RNA的结合，这种结合在细胞分化与增殖中发挥了重要作用。 使用相关技术：RIP-qPCR、RNA免yi共沉淀RIP-Seq、RNA结合蛋白免yi沉淀技术

2. Bao. X.C. et al: The p53-induced lincRNA-p21 derails somatic cell reprogramming by sustaining H3K9me3 and CpG methylation at pluripotency gene promoters. Cell Research.2015, IF=13.9. 【研究内容】：客户利用RNA pull down、CoIP等技术，发现lincRNA-p21与HNRNPK结合，并和甲ji化酶SETDB1、DNMT1形成复合物，作者通过RIP-qPCR进一步证实了细胞中存在该复合物。该复合物甲ji化了多能性基因的启动子序列及相应组蛋白，并改变了它们的表达量，从而进一步影响体细胞重编程过程。 使用相关技术：RIPseq、RNA结合蛋白免yi共沉淀rip qpcr、质谱鉴定

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