GST pull down

GST pull down技术原理
先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育，这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来，即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定出未知蛋白。

GST pull down实验流程

GST pull down技术应用

筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。

几种蛋白互作实验的特点

1. GST pull-down：体外表达诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况；

2. AP-MS：体内表达带标签的诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

3. TAP-MS：体内表达带双标签的诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

4. CoIP：原汁原味的体内蛋白复合物分离，适合于有非常好的IP级别抗体的情况；

5. SILAC-IP：可定量鉴定分析体内蛋白复合物，适合于可传代细胞，尤其是易转基因细胞。

GST pull down技术服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验，众多服务案例，服务成果得到优xiu期刊认可；
2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻，擅长针对客户情况提出合适的方案建议；
3. 自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行蕞优的实验路线；
4. 自有蛋白质组学平台，对微量互作蛋白的质谱鉴定有十足的把控能力，对后续的生物信息分析有独到的见解；
5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。

GST pull down服务信息

项目名称	客户提供	结果交付	实验周期
GST pulldown WB	实验样本 诱饵蛋白的GST原核表达载体 待测蛋白抗体 实验信息表	1、诱饵蛋白WB检测图 2、待测蛋白WB检测图 3、结果整理图 4、实验报告	3-4周
GST pulldown?MS	实验样本 诱饵蛋白的GST原核表达载体 实验信息表	1、诱饵蛋白WB检测图 2、质谱检测结果 3、生物信息学分析结果 4、实验报告	6-7周

GST pull down 客户文献

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research.  2019，IF=9.727. 【研究内容】：前期研究表明，GYS2基因在HCC患者低表达，干扰GYS2基因表达导致肿liu增殖转移。本研究通过融合表达GST-GYS2、His-p53、His-MDnn2，并用GST-pull down方法，证实了MDnn2与p53竞争性结合GYS2基因。相关的COIP、ChIP-qPCR等实验进一步阐明GYS2基因降低肿liu增殖转移的机制。 使用相关技术:gst pulldown测定、GST-pull down质谱分析、GST标签蛋白

2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015，IF=14.467. 【研究内容】：Wnt/β-catenin信号在内皮细胞的血管生成活性中起重要作用。过表达实验表明，转录因子Bach1过表达可抑制后肢缺血小鼠的血管生成，并抑制Wnt3a刺激的血管生成反应和人脐静脉内皮细胞Wnt/β-catenin靶基因的表达。Co-IP实验和gst pull-down分析表明，Bach1直接与TCF4结合，并减少β-catenin与TCF4的相互作用。研究揭示了Bach1抑制外周缺血损伤后的血管生成的作用机制，为血管生成治liao或其他涉及Wnt/β-catenin通路异常调节的疾病提供了新的治liao靶点。 使用相关技术:GST 融合蛋白、GST pull-down实验、GST pull-down技术