transwell细胞共培养实验

细胞传代培养

操作步骤

1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1- -3分钟。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

附:消化液配制方法:

称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存，用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。

透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边.集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

结果评判:调亡细胞体积变小，细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象( citati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生调亡小体。

细胞实验部分设备图片

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