条件性基因敲除小鼠

条件性基因敲除技术原理:

条件性基因敲除主要是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP和 FLP-FRT来实现的。比如在待敲除的一段目标DNA序列的两端各放置一个LoxP（或FRT）序列，得到flox（Flanked by loxP)小鼠。将flox小鼠与带有细胞特异性表达的Cre(或Flp)的小鼠交配繁殖，以获得在特定细胞里把目标基因敲除掉的小鼠，即条件性基因敲除小鼠。其应用可以使靶基因的表达或缺失发生在实验动物发育的某一阶段或某一特定的组织器官，从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。

技术流程

A. 打靶载体构建：（1-2个月）

包括：基因结构分析、筛选策略设计、探针设计/构建和证实、打靶载体构建（体内重组工程）、关键点质控（同源臂、Neo原件盒、报告基因）、制备电转用DNA；Southern杂交探针设计和优化。

B. ES细胞培养和电转（2周）

   ES细胞的培养、打靶载体电转入ES细胞

C. 阳性克隆的筛选和鉴定（4-8周）

通过PCR和Southern杂交对电转后ES细胞进行筛选和鉴定。

D. 阳性ES细胞扩大培养和显微注射（1个月）

   阳性ES细胞显微注射至囊胚，将囊胚植入代孕母鼠，嵌合体小鼠的出生

E. F1代杂合子小鼠的获得（2-3 月）

F. 模式小鼠的运输

服务说明

1、需要您提供的信息

基因名字和您的特殊要求。如果您没有相关的经验，我们会免费为您提供咨询，根据您的需求为您提供最佳的设计方案。

2、我们给您的终产品

不少于两只的F1杂合子小鼠以及相关实验数据。

我们会提供给您相关的检测方法和最终检测报告，您可以自己进行核实检测，也可以在我们的帮助之下完成。

在您的课题进行过程中，我们会每两周为您发送一次课题进展汇报，内容包括课题进展的每一步结果（包括电泳图、PCR结果、酶切结果和杂交结果等），让您清楚的了解自己课题的进展情况，就如同自己的学生在做lab meeting 一样。