广东空调军团菌检测

检测方法有：
1、《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(卫生部，2006年)
2、ISO11731-1998。
1  取样
1.1取样容器
水样可采用玻璃、聚乙烯或类似容器。以前用过的容器应该清洗干净、扣干水分，121℃高压灭菌15min。如果容器不能经受高压灭菌，应在〉70℃的流动热水或流动蒸汽中处理至少5min。
1.2含生物防腐剂的样品
如果水样中含有或被认为含有氧化型生物防腐剂，应在取样时或取样前加入非活性试剂加以中和。
原则上讲，实验室接到水样后应尽快进行微生物学分析，最好是取样当天，尤其对于已知含生物防腐剂的样品。因此，建议从样品采集到制备好浓缩样的间隔最好为2d，不应超过5d，最长不超过14d。
1.3样品运输
样品应在6-18℃条件下被运输，应避免热和光照，最好在1d内，不超过2d将样品送到指定实验室。
2． 制样
2.1 总则
如果液体样品军团菌的数量估计超过105/l，可以采用直接平板法。为了确保低于这个数量样品中军团菌的检测，需采用浓缩技术。为了浓缩水样，可采用膜过滤法（4.2）或离心法（4.3）。
2.2膜过滤法
如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。
采用膜过滤装置进行膜过滤，采用直径47-147mm，孔径0.22μm和0.45μm的膜。过滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎，加5ml-25ml的无菌稀释液或无菌去离子水，不断摇动至少2min。也可将容器放入超声波中2-10min。
2.3离心法
取200ml样品于300-500ml容积的离心瓶中，6000g离心10min或3000g离心30min，保持温度在15-25℃，弃去上清液，将沉淀物悬浮在2-20ml无菌稀释液或无菌去离子水中。
3． 培养
3.1将制备好的样品（浓缩的或未浓缩的）分成3份，1份不做任何处理；1份进行热处理；1份进行酸处理。
3.2热处理
加1±0.5ml样品于一无菌容器中，50±1℃水浴处理30±2min。
3.3酸处理
加1-10ml样品于一拧盖的容器中，6000g离心10min或3000g离心30min，用无菌枪头吸去一半体积的上清液，通过涡旋重新悬浮剩余物，用酸处理缓冲液补足原始体积。混合静置5±0.5min。
3.4选择性培养基的接种
分别接种未处理、热处理和酸处理的样品0.1-0.5ml于GVPC培养基上，热处理和酸处理的样品应在处理完立即接种，记录接种体积。
3.5培养
翻转平板，36±1℃培养10d。
3.6检查平板
在10d的培养期间，用显微镜在2-4d内至少观察3次，军团菌生长较慢，很可能被其他菌掩盖，记录每一种菌落形态的数量。
注：军团菌的菌落通常是白-灰-蓝-紫，但也可能出现棕色、粉色、灰绿色或深红色。军团菌表面光滑，边缘整齐，出现典型的毛玻璃现象。在紫外光下， L.bozemanii, L.gormanii, L.dumoffii, L.anisa, L.cherrii, L.steigerwaltii, L.gratiana, L.tucsonensis和L.parisiensis有亮白色荧光；L.rubrilucens 和L.erythra呈现红色；L.pneumophila菌落呈现暗绿色通常伴随有黄色。荧光的颜色有助于区分样品中军团菌的不同种。为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露在紫外灯下。
3．可疑军团菌的确证
3.1BCYE和其他培养基的二次培养
从每个GVPC平板上至少选择3个可疑军团菌菌落接种到BCYE和BCYE-Cys两块平板上进行二次培养，36±1℃培养至少2d。在BCYE上生长而在BCYE-Cys上不生长的被认为是军团菌。通过血清学实验（6.2）确证在BCYE上生长而在BCYE-Cys上不生长的菌落。
注：血琼脂和营养琼脂可以代替BCYE-Cys培养基。