黄曲霉毒素M1检测试剂盒

一、产品概要

黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。

二、试剂盒原理

黄曲霉毒素M1检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测液态奶、奶粉、淡奶油、发酵乳等样品中的黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素M1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素M1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素M1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素M1的残留量。  

三、使用范围

黄曲霉毒素M1检测试剂盒可定性、定量检测各种各种样本中黄曲霉毒素M1的残留量。

四、 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.025ppb

2.2 反应模式：25℃，30min～15min。

2.3 样本检测下限：

液态奶：0.15ppb  奶粉：0.2ppb   发酵乳、淡奶油：0.1ppb

2.4 样本回收率：

组织：90%±15%

五、试剂盒组成

酶标板、标准液（6个）、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液、复溶液

六、贮藏条件及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒

操作步骤

一、样本前处理

产品适用于液态奶、奶粉、奶油/发酵乳等样本检测，具体处理方法参见相应说明书。

二、 酶联免疫实验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品或样本50?l/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50?l/孔，再加抗体工作液50?l/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

3 洗    涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250?l/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，最后用吸水纸拍干。

4 显    色：加底物液A 50?l/孔，再加底物液B 50?l/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。

5 终    止：加终止液50?l/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。

6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1量成负相关。
1、粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.243； 0.04ppb为1.816；0.12ppb为1.415；0.36ppb为0.74；1.08ppb为0.313；3.24ppb为0.155。则样本1的浓度范围是1.08ppb～3.24ppb；样本2的浓度范围是0.12ppb～0.36ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素M1实际浓度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ B ×100%
 B0 
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/L标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素M1标准品浓度（ng/L）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素M1实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。