全血基因组DNA提取试剂盒D0923

全血基因组DNA提取试剂盒

原理简介
本试剂盒适用于各种动物抗凝全血样本，用于从中提取基因组DNA。独特的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质，并利用玻璃奶吸附DNA，进一步的去掉其他杂质，提取出来，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。

注意事项
1．裂解液低温时可能出现析出和沉淀，可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2．避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3．RNaseA经常使用可放2－8度保存，蛋白酶K请放－20度保存。
4．同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。

操作步骤
在合适的容器中，用双蒸水将红细胞裂解液（10×）稀释成1×。即10ml溶液中加入90ml双蒸水混匀。
1．取不超过500ul抗凝血，加入三倍体积的稀释过的红细胞裂解液，混匀。放置2分钟，12000rpm离心1分钟。去上清。再加入2倍体积的红细胞裂解液，用移液器轻轻吹打沉淀，充分混匀，离心，弃上清，沉淀为白细胞。如果血液为家擒类动物，因为红细胞有核，所以可以省去此步，但加入的样品量不要超过50ul,直接进入下一步。
2．加入250ul裂解液，加入10μl RNase A（10mg/ml）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。
3．加入10μl蛋白酶K（10mg/ml）溶液，颠倒混匀，65℃放置10－30分钟，期间颠倒3－5次，小心内心管盖受热开启。如30分钟沉淀无法完全消失，请注意第6步处理。
4，在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。
5．12000rpm离心5分钟，吸去上清，核酸在沉淀中。
6．沉淀中加入500ul结合液，65℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解（如无法完全溶解，可转移上清到一新的离心管中，弃沉淀）。
6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ul TE缓冲液混匀溶解，65℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。