DNA退火缓冲液（5x）

产品简介 Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)，即 DNA 寡核苷酸退火缓冲液，该退火缓冲液不仅可以用于常规 DNA Oligos 的退火，而且特别适合于较难退火的构建 RNAi（siRNA 和 shRNA） 质粒的 DNA Oligos，可以有效避免 DNA Oligos 自身形成发夹结构，并且两条 Oligos 退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。 保存条件 常温配送。一个月内，4 ?C 保存。-20 ?C 长期保存，至少1年有效。 注意事项 1. DNA 退火缓冲液（5×）只适合于 DNA Oligos 的退火，不能用于 RNA Oligos 的退火。 2. 本产品仅用于科学研究，不得用于临床诊断，不得用于食品和药品，不得存放于普通住宅内。 使用说明 1.将 Oligos 干粉用双蒸水配制成 50 ?M，融化 DNA 退火缓冲液（5×） ，混匀备用。 2.配置如下退火反应体系，混匀。 Nuclease-Free Water 40 ?L DNA 退火缓冲液（5×） 20 ?L DNA Oligo A (50 μM) 20 ?L DNA Oligo B (50 μM) 20 ?L 总体积 100 ?L 3.退火方法一： 将退火反应体系置于 PCR 仪中， 设置反应条件： 95℃变性 2 min， -1℃/30s/cycle 缓慢降温至 25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。 对于易形成发卡结构的 Oligos 可以延长时间降温时间： 95℃变性 2 min， -1℃/90s/cycle 缓慢降温至25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。 4.退火方法二： 将退火反应体系放于 95°C 水浴锅或金属浴， 持续 2 min，后将退火反应体系置于一杯 95°C的水中，让其自然冷却至室温。 若是易形成发卡结构的 Oligos，可以将95°C 水放于保温杯中开盖降温。 Note： 缓慢降温对形成正确的结构是非常有帮助的，降温过快将导致错误结构的产生。 5.退火结束后可直接用于连接反应，也可以-20?C 冻存备用。 若进行酶切等其它反应，更好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%，以避免退火缓冲液对后续酶反应体系的干扰。 6.为了您的健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。