探针法牛支原体实时定量PCR试剂

探针法牛支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Bovis

货号：Mqt-bov-20      规格：20个反应

货号：Mqt-bov-50      规格：50个反应

货号：Mqt-bov-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测牛支原体，与其他生物无交叉反应。

2，  灵敏度高，最低检测极限相当于反应液中约含1个CFU。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

牛支原体（Mycoplasma Bovis）是最重要的致病性牛寄生支原体，呈全球流行趋势，可引起肺炎、关节炎、乳腺炎、中耳炎、结膜炎、生殖紊乱和流产等多种疾病，发病率达到60%-100%，病死率不高，但有时会造成很大的经济损失。在健康或患病的牛身上均可发现牛支原体，其疾病表现和对治疗和疫苗的反应常发生变化，诊断和控制较为困难，因此其流行程度常被低估。

牛支原体的检测方法包括：体外培养法，血清学方法，和遗传学方法。牛支原体的体外培养条件较为苛刻，用时较长，有时甚至要两周时间，并且需要特定的方法来进行鉴定，容易受到其他呼吸道病原体的干扰。血清学方法则必须在感染一段时间之后才能检测，存在检测时间的延迟，此外，实验室菌株和野外分离获得的菌株存在抗原和遗传学上的变异，对检测形成了干扰。因此，高灵敏度和高特异性的PCR法是更好的选择，其检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

由于受到无乳支原体及其他一些近亲支原体的干扰，基于16S rRNA基因的PCR方法往往无法准确鉴别牛支原体。基于DNA复制修复基因uvrC的PCR方法可以对这些支原体进行特异性区分，而且该基因十分稳定，很少发生变异，因此本试剂盒选择uvrC基因作为靶点对牛支原体进行PCR鉴定，经BLAST验证，具有非常好的特异性，与其他生物的基因组无交叉反应。通过检测10种近亲支原体和21种常见细菌，以及19个健康牛肺组织，未见假阳性结果，可见本试剂盒对牛支原体具有特异性。对385个组织样品的检测表明，本试剂盒与培养法检测结果完全一致。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

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