厂商 ：上海浦辰生物科技有限公司
上海 浦东新区- 主营产品：
- RIKEN细胞系
- DSMZ细胞系
- ATCC细胞系
联系电话 ：15841975632
商品详细描述
HFLS-RA贴壁细胞系 "
购买细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。
细胞传代操作步骤
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。" "
细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" "
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的最大利处在于提供了大量的实验材料，便于实验。
传代细胞培养操作步骤：（1）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。（2）向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。（3）置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。（4）吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化。（5）使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。（6）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养。（7）细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
传代细胞培养注意事项：（1）掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤。（2）掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
体内细胞培养及其操作步骤：瘤细胞悬液接种（1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。（2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。（3）培养细胞应用PBS洗两遍。（4）计数并调整细胞浓度至10(7)～10(8)/ml。（5）常规消后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位，＞10(6)细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些。（6）次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，最后固定为一个相对稳定的时间。
腹水瘤的建立与腹水瘤的接种：将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。（1）将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数。（2）消动物，左下腹穿刺接种1×10(6)腹水瘤细胞。（3）接种腹水瘤细胞后约7-12d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消小鼠腹部，用9号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml。（4）抽取的腹水经3000rpm离心15min，收集上清，分装冻存备用。
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
冻存细胞：（1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10(7)/ml左右密度，离心，去上清。（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％亚砜(DMSO) 或，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记。（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃/min的速度，在30～40min时间内，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
复苏细胞：（1）从罐中取出冻存管。（2）迅速放入36℃～37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。（3）冻存管用70％酒精擦拭消后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液。（4）低速离心(500～1000r/min) 5min，去上清后再用培养液洗一次。（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到10(7)/ml，在融后稀释20倍时，仍能保持5×10(5)/ml数量。" "
公司提供部分ATCC细胞有(限于页面篇幅，公司全部细胞并未展示，如有具体所需细胞，请咨询我们哦┈技┈术(订购)┈热┈线：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈号)┈联┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CCL-121|HT-1080细胞；HTB-48|SK-NEP-1细胞；CRL-1619|A-375细胞；CRL-9078|PA317细胞；CRL-1593.2|U-937细胞；HRA-19细胞；HTB-40|HuTu80细胞；CT26细胞；CRL-5867|NCI-H1385细胞；CRL-5850|NCI-H920细胞；CRL-1453|KLN 205细胞；CRL-5869|NCI-H1417细胞；NCI-H1569细胞；CRL-5894|NCI-H1781细胞；NCI-H1954细胞；CRL-5926|NCI-H2135细胞；NCI-H3122细胞；CRL-2882|NCI-H3255细胞；CRL-2869|HCC2935细胞；CRL-2066|DMS114细胞；CRL-2062|DMS53细胞；CRL-5975|UMC-11细胞；CRL-2170|SW1573细胞；HTB-181|NCI-H820细胞；CCL-153|HFL-1细胞；LL2细胞；CRL-2236|SNU-475细胞；CRL-2026|Hepa-1c1c7细胞；CRL-1544|KHOS/NP细胞；HTB-86|SK-ES-1细胞；CRL-2974|MM.1S细胞；CCL-155|RPMI8226细胞；CCL-8|CCRFS-180II细胞；CRL-3001|Z-138细胞；HTB-146|HS445细胞；TIB-203|2PK-3细胞；CRL-1722|L5178-R细胞；MD-2774细胞；OVCAR5细胞；OVCAR8细胞；CRL-2611|LN229细胞；HTB-137|Hs695T细胞；CRL-6322|B16-F0细胞；CloudmanS91细胞；JB6细胞；CRL-2505|22Rv.1细胞；LNCapFGC细胞；PNEC30细胞；HTB-127|MDA-MB-330细胞；HTB-22|MCF7细胞；CRL-1902|UACC893细胞；CRL-2320|HCC1008细胞；" "
公司已合作单位有山西中医学院、福建医科大学附属第二医院、上海市第六人民医院、北京大学医学部、四平中心医院、广州中大学、中科院上海生命科学研究院生化与细胞研究所、第306医院、江南大学、西南医院、吉首大学、西南大学化学化工学院、宁波大学、福建医科大学附属第一医院、中南大学、延安大学附属医院、中国科学院上海药物研究所、天津市儿童医院、江苏省中研究院、湘雅医学院、第四军医大学预防系劳动与环境教研室、扬州大学、上海交通大学、中国医科大学、浙江省立同德医院、中国人民第150中心医院、苏州大学、四川大学华西医院、云南大学、扬州大学兽医学院、上海交通大学医学院附属第九人民医院、海南医学院、江苏肿瘤医院、上海市闵行区中心医院、大连医科大学附属第一医院、中国科学院广州生物与健康研究院、沈阳药科大学、广州市第八人民医院、南京大学、浙江中大学、兰州大学、上海中大学、中国农业科学院饲料研究所、厦门市妇幼保健院、重庆大学、南京军区总医院、天津市人民医院、北京医学科学肿瘤医院、江苏大学、桂林医学院附属医院、中国科学院化学研究所、、郑州大学第一附属医院、湖北省人民医院、四川大学华西第二医院、广州中大学附属第一医院、黑龙江中大学附属第一医院、青海红十字医院、广州医学院第一附属医院、北京红十字朝阳医院、中国医科大学附属一院、江西中医学院附属医院、北京中大学东直门医院、山西医科大学第一附属医院、上海长海医院、北京阜外医院、北京安贞医院、上海远大心胸医院、哈尔滨医科大学第一临床医学院、广东霍英东心脏中心、中山医科大学中山眼科中心、天津眼科医院、温州医学院附属眼视光医院、北京儿童医院、重庆医科大学附属儿童医院、复旦大学附属儿童医院、南京中大学附属第二医院、湖北十堰市太和医院、济南市儿童医院、中南大学湘雅二医院、天津医科大学代谢病医院" "
北京朝阳|海淀|通州|房山|丰台|昌平|大兴|顺义|西城|延庆县|石景山|宣武|怀柔|崇文|密云县|东城|平谷|门头沟|广东东莞|广州|中山|深圳|惠州|江门|珠海|汕头|佛山|湛江|河源|肇庆|清远|潮州|韶关|揭阳|阳江|梅州|云浮|茂名|汕尾|山东济南|青岛|临沂|济宁|菏泽|烟台|淄博|泰安|潍坊|日照|威海|滨州|东营|聊城|德州|莱芜|枣庄|江苏苏州|徐州|盐城|无锡|南京|南通|连云港|常州|镇江|扬州|淮安|泰州|宿迁|河南郑州|南阳|新乡|安阳|洛阳|信阳|平顶山|周口|商丘|开封|焦作|驻马店|濮阳|三门峡|漯河|许昌|鹤壁|济源|上海松江|宝山|金山|嘉定|南汇|青浦|浦东新区|奉贤|徐汇|静安|闵行|黄浦|杨浦|虹口|普陀|闸北|长宁|崇明县|卢湾|河北石家庄|唐山|保定|邯郸|邢台|河北|沧州|秦皇岛|张家口|衡水|廊坊|承德|浙江温州|宁波|杭州|台州|嘉兴|金华|湖州|绍兴|舟山|丽水|衢州|陕西西安|咸阳|宝鸡|汉中|渭南|安康|榆林|商洛|延安|铜川|湖南长沙|邵阳|常德|衡阳|株洲|湘潭|永州|岳阳|怀化|郴州|娄底|益阳|张家界|湘西州|重庆江北|渝北|沙坪坝|九龙坡|万州|永川|南岸|酉阳县|北碚|涪陵|秀山县|巴南|渝中|石柱县|忠县|合川|大渡口|开县|长寿|荣昌县|云阳县|梁平县|潼南县|江津|彭水县|綦江县|璧山县|黔江|大足县|巫山县|巫溪县|垫江县|丰都县|武隆县|万盛|铜梁县|南川|奉节县|双桥|城口县|福建漳州|厦门|泉州|福州|莆田|宁德|三明|南平|龙岩|天津和平|北辰|河北|河西|西青|津南|东丽|武清|宝坻|红桥|大港|汉沽|静海县|塘沽|宁河县|蓟县|南开|河东|云南昆明|红河|大理|文山|德宏|曲靖|昭通|楚雄|保山|玉溪|丽江|临沧|思茅|西双版纳|怒江|迪庆|四川成都|绵阳|广元|达州|南充|德阳|广安|阿坝|巴中|遂宁|内江|凉山|攀枝花|乐山|自贡|泸州|雅安|宜宾|资阳|眉山|甘孜|广西贵港|玉林|北海|南宁|柳州|桂林|梧州|钦州|来宾|河池|百色|贺州|崇左|防城港|安徽芜湖|合肥|六安|宿州|阜阳|安庆|马鞍山|蚌埠|淮北|淮南|宣城|黄山|铜陵|亳州|池州|巢湖|滁州|湖北武汉|宜昌|襄樊|荆州|恩施州|黄冈|孝感|十堰|咸宁|黄石|仙桃|天门|随州|荆门|潜江|鄂州|神农架林|山西太原|大同|运城|长治|晋城|忻州|临汾|吕梁|晋中|阳泉|朔州|辽宁大连|沈阳|丹东|辽阳|葫芦岛|锦州|朝阳|营口|鞍山|抚顺|阜新|盘锦|本溪|铁岭|黑龙江齐齐哈尔|哈尔滨|大庆|佳木斯|双鸭山|牡丹江|鸡西|黑河|绥化|鹤岗|伊春|大兴安岭|七台河|内蒙古赤峰|包头|通辽|呼和浩特|鄂尔多斯|乌海|呼伦贝尔|兴安盟|巴彦淖尔盟|乌兰察布盟|锡林郭勒盟|阿拉善盟|贵州贵阳|黔东南|黔南|遵义|黔西南|毕节|铜仁|安顺|六盘水|甘肃兰州|天水|庆阳|武威|酒泉|张掖|陇南|白银|定西|平凉|嘉峪关|临夏回族自治州|金昌|甘南|吉林吉林|长春|白山|延边州|白城|松原|辽源|通化|四平|宁夏银川|吴忠|中卫|石嘴山|固原" "
C0891 MLg细胞株
C0890 MLE-12细胞株
C0889 MLA-144细胞株
C0888 MKN74细胞株
C0887 MKN-7细胞株
C7153 MKN7细胞株
C0886 MKN-45细胞株
C3036 MKN45细胞株
C0885 MKN-28细胞株
C7152 MKN28细胞株
C0884 MKN-1细胞株
C7151 MKN1细胞株
C1709 MJ细胞株
C1708 Mino细胞株
C0883 Min6细胞株
C7195 mIMCD-3细胞株
C4132 MIApaca-2细胞株
C7173 Miapaca2细胞株
C0881 MH-S细胞株
C6009 MHCC97-L细胞株
C0880 MHCC97L细胞株
C6008 MHCC97-H细胞株
C0879 MHCC97H细胞株
C7056 MHCC97细胞株
C7061 MH-22A细胞株
C7209 MGH-u3细胞株
C0877 MGC80-3细胞株
C7150 MGC803细胞株
C4713 MG-63细胞株
C7106 MFM-223细胞株
C1707 MFE-296细胞株
C1706 MFE-280细胞株
C6034 MFC-GFP细胞株
C0875 MFC细胞株
C1704 MeWo细胞株
C1703 MeT-5A细胞株
C1702 MES-SA/Dx5细胞株
C1701 MES-SA细胞株
C1700 mESCs-11细胞株
C0874 MES-13细胞株
C0873 MEL细胞株
C4509 MEG-01细胞株
C1699 MEF-11细胞株"
购买细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。
细胞传代操作步骤
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。" "
细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" "
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的最大利处在于提供了大量的实验材料，便于实验。
传代细胞培养操作步骤：（1）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。（2）向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。（3）置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。（4）吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化。（5）使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。（6）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养。（7）细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
传代细胞培养注意事项：（1）掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤。（2）掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
体内细胞培养及其操作步骤：瘤细胞悬液接种（1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。（2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。（3）培养细胞应用PBS洗两遍。（4）计数并调整细胞浓度至10(7)～10(8)/ml。（5）常规消后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位，＞10(6)细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些。（6）次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，最后固定为一个相对稳定的时间。
腹水瘤的建立与腹水瘤的接种：将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。（1）将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数。（2）消动物，左下腹穿刺接种1×10(6)腹水瘤细胞。（3）接种腹水瘤细胞后约7-12d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消小鼠腹部，用9号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml。（4）抽取的腹水经3000rpm离心15min，收集上清，分装冻存备用。
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
冻存细胞：（1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10(7)/ml左右密度，离心，去上清。（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％亚砜(DMSO) 或，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记。（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃/min的速度，在30～40min时间内，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
复苏细胞：（1）从罐中取出冻存管。（2）迅速放入36℃～37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。（3）冻存管用70％酒精擦拭消后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液。（4）低速离心(500～1000r/min) 5min，去上清后再用培养液洗一次。（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到10(7)/ml，在融后稀释20倍时，仍能保持5×10(5)/ml数量。" "
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