酵母蛋白小量提取试剂盒
一，试剂盒组份
组份
| (50T)
| (100T)
| 酵母裂解液
| 50mL
| 100mL
| 玻璃珠
| 3g
| 6g
| PMSF(100X)
| 1ml
| 1ml
| β-巯基乙醇
| 1ml
| 1ml
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二，说明
酵母蛋白小量提取试剂盒用于从酵母细胞中分提取可溶性各种蛋白。提取的蛋白可用于各种常规实验。如PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。酵母裂解液中不含任何去污剂，可用各种方法测定蛋白含量。
三，操作步骤
- 酵母常规培养。
- 离心收集酵母。大概50－100ul的积压体积。完全弃上清。
- 加入酵母裂解液，吹打重重悬。再次离心，弃上清（此步的目的是将酵母洗一下，也可以省掉此步）。
- 在酵母菌中，再加入0.5ml裂解液，加入5ul PMSF，5ulβ-巯基乙醇（最好在通风处操作）。加入50mg左右的玻璃珠，预冷，涡流10min（每涡流1min，可以冰上冷却1min）。
- 离心，取上清。进行下一步实验或者-70℃储存。
三，注意事项
1，不同的酵母可能须涡流时间不同，可根据实际情况延长或者缩短时间。（比如蛋白浓度高低，蛋白降解情况等。）
2，如果一个月内能够用完，可将β-巯基乙醇按照百分之一的量一次性全部加入酵母裂解液中。2－8度保存。
3，因为是采用物理方法破解酵母壁，所以对于酶等一些易失活蛋白可能并不适合。
4，为了你的实验安全，请戴手套操作。并注意通风。
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