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蛋白质结晶板
本发明涉及一种蛋白质结晶板,包括结晶板主体部分(10),以及在结晶板主体上以阵列形式分布的储槽单元(20),每一所述储槽单元(20)具有面板(240),在所述面板中间位置形成一凹槽,所述凹槽底部为第二面板(250),蛋白质晶体培养板,在所述第二面板中间位置或靠近一侧的位置凹入形成储槽(220),所述储槽(220)至少一侧的第二面板(250)中形成有至少一个滴液槽(230)。
这是老的简单的结晶方法,其原理是同步地在蛋白质溶液中加入沉淀剂,蛋白质晶体培养板价格,立即使溶液达到一个高过饱和状态。幸运的话,蛋白质晶体培养板多少钱,不需进一步处理即可在过饱和溶液中逐渐长出晶体。一个用于微分批结晶的自动化系统已被Chayen等人设计出(1991,1992),其微分批方法中,他们在1-2μl包含蛋白质和沉淀剂的液滴中生长晶体。
蛋白质结晶方法
液-液扩散(Liquid–Liquid Diffusion) 这种方法中,蛋白质溶液和含有沉淀剂的溶液是彼此分层在一个有小孔的毛细管中,一个测熔点用的毛细管一般即可(如图1.2)。下层是密度大的溶液,例如铵或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀剂,它会在上层。以1:1混合,沉淀剂的浓度应该是所期终浓度的二倍。两种溶液(各自约5μl)通过针头导入毛细管,先导入下层的。通过一个简易的摇摆式离心机去除气泡。再加入上层,进而两层之间形成一个明显的界面,它们会逐渐彼此扩散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno(1994)已经发展液-液扩散技术至法。蛋白质溶液通过毛细力被吸入狭窄的管中,管的一端是封闭的。接着,开放端入置于小容器的凝胶中,凝胶使得管竖直,蛋白质溶液与凝胶接触。含有沉淀剂的溶液被倒在凝胶上,整个装置被保存于封闭的盒子以防蒸发。沉淀剂通过凝胶和毛细管的扩散时间可以由毛细管插入凝胶的深度控制,从而蛋白质溶液中即可形成过饱和区域,毛细管底部高而顶部低。这也可作为一个筛选佳结晶条件的额外信息。
蛋白结晶板发展
获得晶体及提高晶体质量是蛋白质结晶方法学中的两大基本问题.为解决这两个问题,结构生物学家已发展了许多方法,其中针对蛋白质本身进行分子改造是非常重要的方法之一.通过蛋白质工程技术,如突变,还原化修饰,剪切或构象柔性环区,融合蛋白,复合物共结晶,原位蛋白质水解等方法对蛋白质本身进行分子改造,可明显提高其结晶成功率及晶体质量.随着该方面成功案例的不断积累,分子改造技术越来越凸显出其在蛋白质结构解析中的重要作用,特别是对一些难以结晶或提高晶体质量的蛋白质而言,其应用价值更不可忽视.针对近年来分子改造技术在蛋白质结晶中的应用进行了回顾与总结,并展望了其未来的发展。
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