非变性蛋白裂解液

厂商 :武汉百浩天生物科技有限公司

湖北 武汉市
  • 主营产品:
  • 蛋白提取
  • 细胞培养
  • 电泳相关缓冲液
联系电话 :15308622976
商品详细描述

产品简介:
 
产品编号
产品名称
产品包装
产品价格
P1016
非变性蛋白裂解液
100ml
220.00
 
非变性细胞裂解缓冲液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白磷酸酶抑制剂,能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗体结合或酶学活性,因此适宜于进行免疫共沉淀。另外,有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点,这种情况应该使用非变性裂解。
    非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)150mM NaCl1% Triton X-1001% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate25mM β-glycerophosphate1mM EDTA1mM Na3VO40.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
   
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单:
产品编号
产品名称
包装
P1016
非变性蛋白裂解液
100ml
 
PMSF100mM
1.5ml
 
说明书
1
保存条件:
    -20℃保存,一年有效。
注意事项:
    为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4进行。
   
关于裂解液的选择,一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异,选择合适的裂解液;另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
   
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
对于培养细胞样品:
1.
融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM
2. 
对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
   
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3.
充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
   
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品:
1.
把组织剪切成细小的碎片。
2.
融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM
3.
按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4.
用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5.
充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6.
如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

附:我们生产的各种裂解液主要特点、差异和选择
首先请参考下表,了解各种裂解液的主要特点和差异。
产品编号
P1001
P1002
P1004
P1006
P1010
P1012
产品名称
WesternIP细胞裂解液
RIPA裂解液()
RIPA裂解液()
RIPA裂解液()
NP-40裂解液
SDS裂解液
有效裂解成分
1% Triton X-100
1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.25% deoxycholate
1% NP-40
1% SDS
裂解强度
温和


温和
温和

对膜蛋白的提取
一般
很好
较好
一般
一般
很好
对胞浆蛋白的提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
对核蛋白的提取
较好
很好
较好
较好
较好
很好
胞浆磷酸化蛋白提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
细胞核转录因子提取
很好
很好
很好
很好
很好
很好
含蛋白酶抑制剂






含磷酸酯酶抑制剂






主要用途
WB, IP,co-IP
WB, IP
WB, IP
WB, IP, co-IP
WB, IP,co-IP
WB, ChIP
   
用于普通的WesternIPco-IP,我们推荐使用WesternIP细胞裂解液(P1001),该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
   
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现WesternIP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液()NP-40裂解液。
   
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现WesternIP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)SDS裂解液。

 


P0270

5×蛋白上样缓冲液(配有β-巯基乙醇)

10ml

120

P0280

5×蛋白上样缓冲液(含DTT

1ml/10ml

40/160

P0290

5×非变性蛋白上样缓冲液

10ml

100

P0300

Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液(干粉)

10L

180

P0310

10×电泳转移缓冲液

500ml

100

P0320

10%过硫酸氨(干粉)

1ml

15

P0420

10%SDS

100ml

48

P0330

30%丙烯酰胺/甲叉溶液(29:1

100ml/500ml

60/180

P0335

40%丙烯酰胺/甲叉溶液(37.5:1

100/500ml

80/280

P0350

4×SDS-PAGE分离胶缓冲液

100ml/500ml

60/180

P0360

4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液

100/500ml

60/180

P0370

10×丽春红染液

10ml

90

P0380

考马斯亮蓝快速染色液

500ml

100

P0390

1M Tris-HCL(PH6.8)

100/500ml

40/160

P0400

1.5M Tris-HCL(PH8.8)

100/500ml

46/160

P0120

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

2500微孔

150

P0130

BCA蛋白浓度测定试剂盒

500微孔

280

P0040

线粒体提取试剂盒

50T/100T

320/580

P0045

植物线粒体提取试剂盒

50T/100T

420/780

P0050

细胞核提取试剂盒

50T/100T

320/580

P0260

PMSF(100mM)

1.5/10ml

30/100

P1001

WesternIP细胞裂解液

100ml

220

P1002

RIPA裂解液()

100ml

220

P1004

RIPA裂解液()

100ml

220

P1006

RIPA裂解液()

100ml

220

P1008

RIPA裂解液(强中弱套装)

3*50ml

280

P1010

NP-40裂解液

100ml

220

P1012

SDS裂解液

100ml

220

P1014

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

50T/200T

420/980

P1016

非变性细胞裂解缓冲液

100ml

220

P1240

酵母蛋白小量提取试剂盒

50T/100T

320/560

P0430

20×TBS

500ml

100

P0440

TBSTTBS-T

500ml

60

P0470

膜封闭液

100ml

42

P0480

膜再生液

100ml/500ml

60/180

P0500

SDS-PAGE蛋白电泳套装

50T

460

P1260

ECL超敏发光液

25ml/100ml/250ml

160/480/960

N0160

TMB单组分显色液

100ml/500ml

220/820

A0050

DAB显色试剂盒(20×)

3ml

100

A0080

4%多聚甲醛

100/500ml

60/200

A0070

10×多聚赖氨酸溶液(免疫组化)

10ml

260

A0090

抗荧光衰减封片剂

5ml/25ml

70/240


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