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PCR是现在实验室常用的技术手段之一。一般用于病原的检测,分子机制中各基因的检测以及遗传相关的检测广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型:(1)外参法终产物分析。2)内参法终产物分析3)外标法过程监测4)内参法过程监测5)外标法过程监测内对照。
PCR种检查的方式是用固定的探针来探测基因片段。这种事叫体外基因碱基对扩增试验。比如说可以检查到某些病毒的基因片段。常用的比如说检查乙干病毒的复至量就是用这样的检查方法。
PCR检测试剂盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
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大豆PCR检测试剂盒荧光PCR简述
定义:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化,通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。
荧光PCR检测分为两种方法:荧光探针法和荧光染料法。
荧光PCR如何实现实时监控的呢?
PCR反应体系中加入荧光染料
所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分(检测器、激发光源、热循环模块)
在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强
PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析

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