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PCR是现在实验室常用的技术手段之一。一般用于病原的检测,分子机制中各基因的检测以及遗传相关的检测广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型:(1)外参法终产物分析。2)内参法终产物分析3)外标法过程监测4)内参法过程监测5)外标法过程监测内对照。
PCR种检查的方式是用固定的探针来探测基因片段。这种事叫体外基因碱基对扩增试验。比如说可以检查到某些病毒的基因片段。常用的比如说检查乙干病毒的复至量就是用这样的检查方法。
PCR检测试剂盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
1.引物3'端的碱基,荧光定量PCR快速检测试剂盒价钱,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
2引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子很有好处。
3引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
PCR原理用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段,类似于天然DNA的copy过程。以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5’末端和3’末端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留copy的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合
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