细胞冻存管

应用领域——生物学方向细胞冻存技术是生物学保存物种的重要手段。在环境遭到未有过的破坏动物、植被随时可能面临灭l绝危险的今天，更是尤为关键，虽然不是治本的方法，但至少可以尽可能的留下那些曾经存在的生命痕迹。

发展历史：1. 1776年， Spallanzani尤早发表了“冷”处理对“细胞”生命活动影响的报道。2.十九世纪中后叶，许多早期的工作者(Prevost， 1840; de Quatrefages， 1853; Mantegazza，临汾冻存管， 1866; Scheuk，液氮冻存管， 1870) 重复研究了低温处理对精l子活动的影响，得出了和SpalLanzani相似的结论。即“冷不能杀l死精l子”。

2)离心洗涤:向培养瓶内加5~10m1预冷的MEM使细胞悬浮，细胞冻存管，再将其吸出置灭菌离心管中，以1000rpm 离心8~10分钟后弃去上清液。

3)细胞悬液的制备:向离心管内逐滴缓慢加入预冷的冻存保护液，使细胞浓度为150~400万/ml，然后迅速分装于安瓿瓶中，每瓶加量为1ml。 

4)致冷冻:将安瓿瓶放入带有棉垫的纸盒或塑料盒内，直立置不同条件下致冷冻保存:a. 4℃两小时后移至-20℃作用2小时，再移入-40℃4小时后在-70℃下24小时投入液氮。b. -20℃4小时后移至-40℃，经4小时移人-70℃冰箱24小时，投入液氮。c. -40℃4小时后移入-70℃24小时后投入液氮。d. -20℃4小时后移入-70℃经24小时后投入液氮中。

冻存和复苏的原则：慢冻快融。当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶，相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破且裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。

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