养猪场非洲猪瘟病毒检测

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猪流行性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒都具有在猪源原料中存活的能力；然而，作用机制目前尚不清楚。根据应对流行性腹泻病毒的经验，在不影响动物性能和饲料成本的情况下，替换原料的可行性使得很多生产者不再使用猪源原料。研究表明热工过程可以杀灭病毒（如流行性腹泻病毒），但这只能作为紧急缓解措施，因为这要求产品在干燥和运输过程中必须不存在交叉污染。如果生产者认可排除猪源原料是可行的，那么还应该考虑到那些间接的猪源原料，像添加剂、基础混合物和那些可能源于猪源的动物蛋白或脂肪等。

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首先，养猪场（户）真正了解所使用的饲料原料的供应链非常重要。包括：从谁那里购买了原料？他们又从哪里买到？在运输中是否与其他原料混杂或混合？每个中转地点的生物安全政策是什么？这些对于正确评估原料携带外来动物疾病的风险非常重要。其次，饲料厂要注重生物安全。在不使用时盖住接收坑，有效地控制害虫，防止灰尘收集系统中的灰尘再循环回到饲料中，并管理好整个工厂的人员移动。最后，养猪场和饲料厂要考虑监测环境，以实现生物安全合规性。环境监测在人类食品和宠物食品行业已经成为常规举措，可以帮助人们发现生物安全计划中的薄弱环节。

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一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖， 无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值.

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什么是荧光定量PCR？常规PCR中，扩增产物（扩增子）是通过终点法来分析检测，即PCR反应结束后，DNA通过琼脂糖凝胶电泳，然后进行成像分析。而荧光定量PCR可以在反应进行过程中进行累积扩增产物的分析和检测，即“实时”。在反应体系中加入荧光分子，通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加，使PCR产物的实时检测成为可能。满足实验目的的荧光化学物质包括DNA结合染料和荧光标记的序列特异引物或探针；专门的热循环仪配备荧光检测模块，用于监测扩增时的荧光，检测到的荧光信号反映了每个循环扩增产物的量。

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定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。

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PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，养猪场非洲猪瘟病毒检测，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步.

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